在一定的溫度和pH條件下,當(dāng)?shù)孜餄舛茸阋允姑革柡偷那闆r下,酶的濃度與酶促反應(yīng)速度呈正比關(guān)系。
pH對(duì)酶反應(yīng)速度的影響
pH對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響酶反應(yīng)介質(zhì)的pH可影響酶分子,特別是活性中心上必需基團(tuán)的解離程度和催化基團(tuán)中質(zhì)子供體或質(zhì)子受體所需的離子化狀態(tài),也可影響底物和輔酶的解離程度,從而影響酶與底物的結(jié)合。只有在特定的pH條件下,酶、底物和輔酶的解離情況,最適宜于它們互相結(jié)合,并發(fā)生催化作用,使酶促反應(yīng)速度達(dá)最大值,這種pH值稱(chēng)為酶的最適pH。 胰蛋白酶大部分酶的活力受其環(huán)境pH的影響,在一定pH下,酶促反應(yīng)具有最大速度,高于或低于此值,反應(yīng)就會(huì)下降,通常稱(chēng)此pH為酶的最適pH。不同酶的最適pH不同。 右圖:例如:胃蛋白酶的最適pH為1.5~2.2,胰蛋白酶的最適pH為8.0~9.0,唾液淀粉酶的最適pH為6.8等。動(dòng)物酶多在pH6.5~8.0之間,植物及微生物多在pH4.5~6.5之間,但也有例外。如:真菌的最適pH為5.0~6.0,多數(shù)細(xì)菌的最適為6.5~7.5,放線菌的最適在7.5~8.5。 體內(nèi)多數(shù)酶的最適pH值接近中性,但也有例外,如胃蛋白酶的最適pH約1.8,肝精氨酸酶最適pH約為9.8。溶液的pH值高于和低于最適pH時(shí)都會(huì)使酶的活性降低,遠(yuǎn)離最適pH值時(shí)甚至導(dǎo)致酶的變性失活(圖)。所以測(cè)定酶的活性時(shí),應(yīng)選用適宜的緩沖液,以保持酶活性的相對(duì)恒定。臨床上根據(jù)胃蛋白酶的最適PH偏酸這一特點(diǎn),配制助消化的胃蛋白酶合劑時(shí)加入一定量的稀鹽酸,使其發(fā)揮更好的療效。 pH影響酶活性的主要原因
過(guò)酸、過(guò)堿影響了酶分子的結(jié)構(gòu),甚至使酶變性失活。
應(yīng)該注意的是,酶在試管中的最適pH與它在正常細(xì)胞中的生理pH值并不一定完全相同。這是因?yàn)橐粋€(gè)細(xì)胞內(nèi)可能會(huì)有幾百種酶,不同的酶對(duì)此細(xì)胞內(nèi)的生理pH的敏感性不同;也就是說(shuō)此pH對(duì)一些酶是最適pH,而對(duì)另一些酶則不是,不同的酶表現(xiàn)出不同的活性。這種不同對(duì)于控制細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜的代謝途徑可能具有很重要的意義。 溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響
化學(xué)反應(yīng)的速度隨溫度增高而加快,但酶是蛋白質(zhì),可隨溫度的升高而變性。在溫度較低時(shí),前一影響較大,反應(yīng)速度隨溫度升高而加快。但溫度超過(guò)一定范圍后,酶受熱變性的因素占優(yōu)勢(shì),反應(yīng)速度反而隨溫度上升而減慢。常將酶促反應(yīng)速度最大的某一溫度范圍,稱(chēng)為酶的最適溫度。
人體內(nèi)酶的最適溫度接近體溫,一般為37℃~40℃之間,若將酶加熱到60℃即開(kāi)始變性,超過(guò)80℃,酶的變性不可逆。
溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響在臨床實(shí)踐中具有指導(dǎo)意義。低溫條件下,酶的活性下降,但低溫一般不破壞酶,溫度回升后,酶又恢復(fù)活性。所以在管理技術(shù)操作中對(duì)酶制劑和酶檢測(cè)標(biāo)本(如血清等)應(yīng)放在冰箱中低溫保存,需要時(shí)從冰箱取出,在室溫條件下等溫度回升后再使用或檢測(cè)。溫度超過(guò)80℃后,多數(shù)酶變性失活,臨床應(yīng)用這一原理進(jìn)行高溫滅菌。
酶的最適溫度與反應(yīng)所需時(shí)間有關(guān),酶可以在短時(shí)間內(nèi)耐受較高的溫度,相反,延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間,最適溫度便降低。據(jù)此,在生化檢驗(yàn)中,可以采取適當(dāng)提高溫度,縮短時(shí)間的方法,進(jìn)行酶的快速檢測(cè)。
不同的溫度對(duì)活性的影響不同,但都有一個(gè)最適溫度。在最適溫度的兩側(cè),反應(yīng)速度都比較低。
溫度對(duì)酶促反應(yīng)的影響包括兩方面:一方面是當(dāng)溫度升高時(shí),反應(yīng)速度也加快,這與一般化學(xué)反應(yīng)相同。另一方面,隨溫度升高而使酶逐步變性,即通過(guò)減少有活性的酶而降低酶的反應(yīng)速度。在低于最適溫度時(shí),前一種效應(yīng)為主,在高于最適溫度時(shí),則后一種效應(yīng)為主,因而酶活性喪失,反應(yīng)速度下降。 在制備培養(yǎng)基的過(guò)程中,可采用高溫對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌,主要是破壞了微生物體內(nèi)的酶的活性。采用高溫滅菌在醫(yī)學(xué)和生活實(shí)踐中都有較廣泛的應(yīng)用。
在低溫的條件下,酶的活性降低,但酶分子的結(jié)構(gòu)一般還會(huì)發(fā)生改變。所以,人們可以選擇在低溫下保存酶。在生活實(shí)踐中人們也經(jīng)常選擇在低溫下較長(zhǎng)時(shí)間保存食品。
抑制劑的作用
通過(guò)改變酶必需基團(tuán)的化學(xué)性質(zhì)從而引起酶活力降低或喪失的作用稱(chēng)為抑制作用,具有抑制作用的物質(zhì)稱(chēng)為抑制劑,抑制劑通常是小分子化合物,但在生物體內(nèi)也存在生物大分子類(lèi)型的抑制劑。
酶的抑制劑分類(lèi)
激活劑的作用
酶的活力可以被某些物質(zhì)提高,這些物質(zhì)稱(chēng)為激活劑,在酶促反應(yīng)體現(xiàn)中加入激活劑可導(dǎo)致反應(yīng)速率增加。通常酶對(duì)激活劑有一定選擇性,且有一定濃度要求,一種酶的激活劑對(duì)另一種酶可能是抑制劑,當(dāng)激活劑的濃度超過(guò)一定的范圍時(shí),它就成為抑制劑。