環(huán)境因素、操作因素、實驗方法或者患者自身因素等都可能造成假陽性檢測結果。以梅毒檢測為例,分析造成假陽性的普遍原因:
梅毒的診斷主要靠臨床癥狀和血清檢查,常見的是梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(PA)和梅毒螺旋體酶聯免疫吸附試驗(ELISA),PA已經確定為美國疾控中心的標準方法。ELISA因其操作方便,結果較為準確,價格低廉在國內還受到廣泛的使用。梅毒的診斷主要靠臨床癥狀和血清檢查,無臨床癥狀和疾病接觸史可出現假陽性,其主要原因有以下幾點: 1.標本因素
1.1標本處理不完全:血液標本未完全抗凝即開始離心,析出的纖維蛋白易在孔板中形成白色薄膜或者絮狀物,若清洗不干凈,殘余在孔板中極易使吸光度值偏高,造成假陽性。
1.2標本溶血:血液樣本溶血后細胞內的各種酶和具有酶樣活性的物質可與底物非特異性結合,標本溶血時細胞內液的各種活性酶及具有酶樣活性的物質可與底物非特異性結合;溶血后釋放出的血紅蛋白(Hb)具有類過氧化物酶的活性,可少量吸附于孔板上,隨著溶血程度增大而增加,在洗板不徹底的情況下從而使樣本OD值升高,造成假陽性。 1.3標本被細菌污染:標本采集后及分離血清時若被細菌污染,也可引起內源性辣根過氧化物酶增多,相應的酶標記方法會產生非特異性干擾,造成假陽性。
1.4標本保存不當:血液標本保存過久易滋生細菌,影響檢測結果。時間過長的標本,血清標本IgG聚集成多聚體,AFP形成二聚體,造成假陽性。 2.使用儀器及操作因素
2.1拖帶現象:全自動家養(yǎng)系統(tǒng)可以準確、快速加樣,避免手工的誤差也保證了加樣的一致性。但是全自動加樣儀還不能完全確保一份樣本一個加樣頭。加完樣后雖然其可以自動清洗3次,而高濃度的抗原或者抗體標本檢測后,拖帶污染可能導致后面或者多孔樣本的假陽性。
2.2酶標儀:酶標儀進行比色時,當反應板有氣泡或者污 染時,容易出現吸光度值升高,從而造成假陽性結果。
2.3試驗溫度:試驗溫度過高或過低都有可能引起血清蛋白異常,造成假陽性。最好在室溫18~25℃進行操作。
2.4操作因素:操作過程中一些因素也會導致假陽性,檢測底物反復使用出現被污染或者底物受到陽光照射時間過長會出現假陽性;孔板洗滌過程中出現溢出現象,陽性標本的反應液污染臨近孔板造成假陽性;洗滌過程中洗滌時間太短或次數太少,洗滌不充分導致酶制劑殘留形成假陽性。
3.個人因素
3.1生理機能:ELISA試劑盒主要是通過抗原抗體檢測梅毒螺旋體,理論上ELISA的位點少,結果更具特異性,但由于人血清抗原中存在假陽性位點的問題,造成假陽性。老年人身體機能退化,易出現免疫功能異常,產生乙烯異常蛋白干擾檢測結果。
3.2疾?。豪夏耆碎L伴有各種疾病,如腸癌、肺癌、腹腔內膜癌、子宮內膜癌等腫瘤,肺結核,血液病,自身免疫性疾病,可以導致患者自身免疫環(huán)境的改變,或者糖尿病、腫瘤、肝病、類風濕性關節(jié)炎患者體內含有治療性抗體、糖尿病抗體、類風濕因子、甲胎蛋白等,使底物出現顯色反應,造成假陽性結果。 4.方法學因素
4.1灰?guī)^(qū)現象
ELISA是一種定性檢測梅毒的方法,在陽性與陰性之間有一條分界線,即判定值,通常在判定值左右有一定的范圍,為灰?guī)^(qū)。結果位于灰?guī)^(qū)的標本易出現假陽性,需要重新檢測確定是否為陽性。
4.2空白對照的影響
空白對照組對結果具有很大的影響,比如反應孔出現刮痕,可使測定值升高,不設定對照組也可出現誤讀形成假陽性。