有限稀釋法是一種常用的克隆方法,將需要再克隆的細(xì)胞株自培養(yǎng)孔內(nèi)吸出并作細(xì)胞計(jì)數(shù),計(jì)出1mL的細(xì)胞數(shù)。

正文

用HT培養(yǎng)液稀釋,使細(xì)胞濃度為50~60個(gè)/mL,于96孔培養(yǎng)板中每孔加0.1mL(五六個(gè)細(xì)胞/孔)。接種2排,剩余細(xì)胞懸液用HT培養(yǎng)液作倍比稀釋,再接種2排,如此類推,直至使每孔含0.5~1個(gè)細(xì)胞。培養(yǎng)7~10d后,選擇單個(gè)克隆生長(zhǎng)的陽性孔再一次進(jìn)行克隆。一般需要如此重復(fù)3~5次,直至達(dá)100%陽性孔率時(shí)即可,以確??贵w由單個(gè)克隆所產(chǎn)生。