TAE緩沖液是由三羥甲基氨基甲烷(Tris base)、乙酸(acetic acid)和乙二胺四乙酸(EDTA)組成的緩沖液,英文名為三種組成成分的首字母。在分子生物學(xué)實驗中常被用作DNA或RNA進行凝膠電泳時的緩沖液。緩沖液在電泳過程中的一個作用是維持合適的pH。電泳時正極與負極都會發(fā)生電解反應(yīng),正極發(fā)生的是氧化反應(yīng)(4OH-4e=2H2O+O2),負極發(fā)生的是還原反應(yīng)(4H+4e=2H2),長時間的電泳將使正極變酸,負極變堿。一個好的緩沖系統(tǒng)應(yīng)有較強的緩沖能力,使溶液兩極的pH保持基本不變。電泳緩沖液的另一個作用是使溶液具有一定的導(dǎo)電性,以利于DNA分子的遷移,例如,一般電泳緩沖液中應(yīng)含有0.01-0.04mol/L的Na+離子,Na+離子的濃度太低時電泳速度變慢;太高時就會造成過大的電流使膠發(fā)熱甚至熔化。電泳緩沖液還有一個組分是EDTA,加入濃度為1-2mmol/L,目的是螯合Mg2+ 等離子,防止電泳時激活 DNA酶,此外還可防止Mg2+離子與核酸生成沉淀。

中文名

TAE緩沖液

別名

TAE Buffer

氧化反應(yīng)

(4OH--4e-=2H2O+O2)

還原反應(yīng)

(4H++4e-=2H2)

作用

維持合適的pH

概述

TAE是使用最廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點是超螺旋在其中電泳時更符合實際相對分子質(zhì)量(TBE中電泳時測出的相對分子質(zhì)量會大于實際分子質(zhì)量),且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種(TAE和TBE)緩沖液快約10%,電泳大于13kb的片段時用TAE緩沖液將取得更好的分離效果,此外,回收DNA片段時也易用TAE緩沖系統(tǒng)進行電泳。TAE的缺點是緩沖容量小,長時間電泳(如過夜)不可選用,除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換

配方

50×TAE Buffer 配制方法:

1。稱量Tris 242g,EDTA 18.612g于1L燒杯中;

2。向燒杯中加入約800ml去離子水,充分攪拌均勻;

3。加入57.1ml的冰乙酸,充分溶解;

4。用NaOH調(diào)pH至8.3,加去離子水定容至1L后,室溫保存。

使用時稀釋50倍或100倍 即1×TAE Buffer 或 0.5×TAE

TBE與TPE

TBE的特點是緩沖能力強,長時間電泳時可選用TBE,并且當用于電泳小于1kb的片段時分離效果更好。TBE用于瓊脂糖凝膠時易造成高電滲作用,并且因與瓊脂糖相互作用生成非共價結(jié)合的四羥基硼酸鹽復(fù)合物而使DNA片段的回收率降低,所以不宜在回收電泳中使用。

TPE的緩沖能力也較強,但由于磷酸鹽易在乙醇沉淀過程中析出,所以也不宜在回收DNA片段的電泳中使用。